這是關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)污染的三部分系列的第二部分。
正如在這個(gè)三部分文章系列的**部分中提到的，生物污染是每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題。由于對(duì)結(jié)果數(shù)據(jù)的可靠性有影響，因此將污染的發(fā)生保持在****低限度是**關(guān)重要的。討論了污染的常見(jiàn)來(lái)源，在這里我們看看二氧化碳培養(yǎng)箱的使用及其在提供安全環(huán)境中的作用，沒(méi)有任何潛在的污染微生物。
細(xì)胞培養(yǎng)依賴于使用培養(yǎng)箱來(lái)維持保持細(xì)胞存活的正確條件。二氧化碳專門用于模擬哺乳動(dòng)物的生理?xiàng)l件。因此，培養(yǎng)箱將細(xì)胞所需的元件結(jié)合：37℃（98.6°F）的穩(wěn)定溫度，7.4**7.6的受控pH，與受控的CO 2水平和95％的高相對(duì)濕度平衡。不幸的是，哺乳動(dòng)物細(xì)胞的理想環(huán)境也為我們身體內(nèi)和身上的正常菌群的一系列生物污染物提供了理想的環(huán)境。這就是為什么理解良好的實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐以及如何選擇合適的設(shè)備可以幫助減少污染是如此重要。某些CO2培養(yǎng)箱，例如，
正確：良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范
良好的實(shí)驗(yàn)室操作是防止污染的**有效的方法。穿著一件帶有彈性袖帶的實(shí)驗(yàn)室外套，覆蓋街頭衣服，在開(kāi)始任何細(xì)胞工作和戴一次性手套之前徹底洗手，工人可以大大降低潛在的污染。盡可能多地，文化主義者還應(yīng)避免接觸門把手，電話，計(jì)算器等物品; 避免佩戴shou飾; 并綁回長(zhǎng)長(zhǎng)的頭發(fā)。任何患有感冒或其他呼吸道感染的人應(yīng)戴口罩，以盡量減少感染的潛在傳播。
冰箱，冷凍箱，儲(chǔ)物柜和長(zhǎng)凳的工作區(qū)域和頂部應(yīng)保持清潔，整潔，無(wú)灰塵。地板應(yīng)定期清潔，特別是角落，以減少灰塵和污垢，由于交通在房間里的流通。此外，應(yīng)清潔實(shí)驗(yàn)室設(shè)備（例如，機(jī)械移液器，渦流，水浴，離心機(jī)），并定期檢查污染跡象。沒(méi)有適當(dāng)?shù)臒o(wú)菌技術(shù)的替代品。文化和媒體應(yīng)只在生物安全柜中打開(kāi)，不應(yīng)由人員共享。常見(jiàn)的污染途徑是當(dāng)培養(yǎng)基液滴保留在培養(yǎng)容器和其蓋子之間或培養(yǎng)基瓶的頸部上時(shí)形成的液體“橋”進(jìn)入。
二氧化碳培養(yǎng)箱作為培養(yǎng)細(xì)胞的家，是必須保持良好實(shí)驗(yàn)室操作的關(guān)鍵點(diǎn)。記住，哺乳動(dòng)物細(xì)胞的**環(huán)境也是微生物伴侶的誘人環(huán)境。由于任何培養(yǎng)箱污染物的進(jìn)入路徑是通過(guò)敞開(kāi)的門，需要建立一個(gè)將門開(kāi)口保持**小的工作系統(tǒng)。嘗試限制共享培養(yǎng)箱的人數(shù)，以減少污染源。設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)和定期清潔程序（每周或每月），并立即使用70％酒精清除任何溢出物。
培養(yǎng)箱設(shè)計(jì)：保持污染檢查
二氧化碳培養(yǎng)箱的設(shè)計(jì)可以是減少生物制劑污染的重要因素。有許多有用的功能，簡(jiǎn)化清潔，并提供持續(xù)保護(hù)，防止日常使用中的污染。這些能力區(qū)分培養(yǎng)箱的選擇，重要的是認(rèn)識(shí)到不同制造商的類似選項(xiàng)不一定提供相同的結(jié)果。
容易清洗
當(dāng)孵育器易于清潔并且具有**小的內(nèi)表面時(shí)，可以顯著地控制微生物的存在。具有圓角的培養(yǎng)箱消除了裂縫和邊緣，微生物可以隱藏和繁榮。電拋光的表面去除微小的凹陷，否則這些微小的凹陷將用作細(xì)菌的隱藏孔。
清潔培養(yǎng)箱時(shí)有幾個(gè)好的規(guī)則：
如果存在水盤，向水中添加安全的抗微生物劑是一個(gè)好主意。在平底鍋中使用蒸餾水，每周更換一次。在整個(gè)清潔過(guò)程中一定要戴手套和實(shí)驗(yàn)室外套，以盡量減少引入新的污染生物體。
高溫消毒
在一些培養(yǎng)箱上可用的方便的選擇是自動(dòng)化高干熱或濕熱消毒循環(huán)。大多數(shù)這些設(shè)計(jì)為用空培養(yǎng)箱運(yùn)行過(guò)夜。高熱消毒提供了一個(gè)有效的方法，以確保培養(yǎng)箱的內(nèi)部沒(méi)有細(xì)菌，當(dāng)你的細(xì)胞**進(jìn)入培養(yǎng)箱在一個(gè)清潔周期后。有不同的制造商提供不同的選擇，但不是所有這些都同樣有效，2,3和用戶應(yīng)該決定哪個(gè)選項(xiàng)**適合他們的需求。
雖然消毒循環(huán)不能消除對(duì)常規(guī)清潔培養(yǎng)箱的需要，但它可以消除對(duì)單獨(dú)高壓滅菌內(nèi)部部件的需要，并消除“駐留”污染的風(fēng)險(xiǎn)。
空氣過(guò)濾
一些CO2培養(yǎng)箱上的一個(gè)常見(jiàn)功能是HEPA過(guò)濾器，其將過(guò)濾內(nèi)部空氣，去除微生物，微粒，氣溶膠，甚**在一些情況下，揮發(fā)性有機(jī)化學(xué)品。100級(jí)HEPA過(guò)濾器應(yīng)能快速提供潔凈室空氣質(zhì)量，以便消除通過(guò)門進(jìn)入的任何污染物。
考慮在開(kāi)門之后獲得**大空氣質(zhì)量所需的時(shí)間，特別是如果頻繁的門開(kāi)啟是不可避免的。此恢復(fù)時(shí)間可能因制造商而異。4 HEPA過(guò)濾器需要少量維護(hù)，但應(yīng)定期更換（即每六個(gè)月）以獲得**佳效果。
抗菌表面
歷史上，銅已被用作控制微生物污染的方法，包括細(xì)菌，病毒和真菌的微生物污染。包括阿茲臺(tái)克人，希臘人和羅馬人在內(nèi)的古代文明使用銅作為皮膚病和傷口的局部治療，5長(zhǎng)期以來(lái)，銅管已被安全地用于儲(chǔ)存水和其他食物。銅可以鈍化酶并損傷細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，因?yàn)镃u 2+離子穿透細(xì)胞膜的孔并與酶的-SH基團(tuán)反應(yīng)，從而改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。不銹鋼和鋁不抑制微生物的壽命，并且具有**小銅含量的合金顯示更少的益處。抗菌效果與所用銅的量和質(zhì)量直接相關(guān)。純銅已被證明是**有效的抗菌表面材料，具有在僅1.5小時(shí)內(nèi)滅活耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的能力。含有較少銅的合金，例如黃銅，顯示出非常慢的響應(yīng)和總體上相當(dāng)?shù)偷目刮⑸镄Ч?
一些二氧化碳培養(yǎng)箱提供了銅內(nèi)部的選擇以抑制當(dāng)門打開(kāi)時(shí)可能進(jìn)入培養(yǎng)箱的任何細(xì)菌的生長(zhǎng)。如上所述，只有100％的純銅將在幾分鐘內(nèi)有效地消除微生物污染物。固體銅中的Cu 2+離子不會(huì)變成空氣傳播，因此培養(yǎng)皿和燒瓶中的培養(yǎng)物沒(méi)有風(fēng)險(xiǎn)。這是在細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)箱中具有連續(xù)抗微生物保護(hù)的偉大方式，其將持續(xù)培養(yǎng)箱的壽命，同時(shí)需要**小的維護(hù)。加利福尼亞生殖實(shí)驗(yàn)室的Imam El-Danasouri，一個(gè)長(zhǎng)期使用銅襯的培養(yǎng)箱，解釋說(shuō)：“...銅培養(yǎng)箱減少加濕水或培養(yǎng)箱壁上感染的可能性。” 6
防護(hù)外部環(huán)境
大多數(shù)培養(yǎng)箱都有一個(gè)固體玻璃內(nèi)門，以保護(hù)樣品免于意外暴露于外部環(huán)境。分開(kāi)的氣密內(nèi)門將進(jìn)一步有助于**小化在門打開(kāi)之后的暴露和速度恢復(fù)**設(shè)定條件。這個(gè)分開(kāi)的內(nèi)門可以提供三個(gè)或六個(gè)單獨(dú)的較小的門，其允許進(jìn)入培養(yǎng)箱的特定部分而不干擾其他區(qū)域。分隔的內(nèi)門減少了微生物進(jìn)入培養(yǎng)箱的任何機(jī)會(huì)，并使來(lái)自培養(yǎng)箱的熱，大氣和濕度的損失**小化。
外部水源
生命需要水，當(dāng)然包括微生物。雖然他們喜歡在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)溫暖，潮濕的氣氛，水盤是特別邀請(qǐng)。通常將抗菌化合物，銅線甚**硬幣加到水盤中。具有**應(yīng)用或特別有價(jià)值的樣品的實(shí)驗(yàn)室也可以考慮將加濕器水源移動(dòng)到培養(yǎng)箱外部的培養(yǎng)箱設(shè)計(jì)，從而完全從培養(yǎng)箱內(nèi)部去除這種污染源。
結(jié)論：戰(zhàn)斗一場(chǎng)勝利的戰(zhàn)斗
細(xì)胞培養(yǎng)物的生物污染是每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)使用者的偶然問(wèn)題。污染每年花費(fèi)數(shù)百萬(wàn)美元的時(shí)間和材料損失，否則可能花費(fèi)在研究和開(kāi)發(fā)上。雖然細(xì)胞培養(yǎng)物污染不能完全消除，因?yàn)槲⑸锸俏覀兊暮愣ò閭H，可以實(shí)施精細(xì)控制的過(guò)程以減少發(fā)作的影響。良好的無(wú)菌技術(shù)，清潔的實(shí)驗(yàn)室和對(duì)污染途徑的了解，包括進(jìn)入二氧化碳培養(yǎng)箱本身是**關(guān)重要的。二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商是該過(guò)程的合作伙伴，現(xiàn)在提供許多選項(xiàng)，幫助**小化培養(yǎng)箱的污染。
在本系列的第三篇和**后一篇文章中，我們將介紹這里提到的預(yù)防措施和技術(shù)，使您能夠自信地保持無(wú)污染的文化環(huán)境。
