主支細胞培養(yǎng)室

CO2培養(yǎng)箱/新Brunswick S41i / Eppendorf

CO2培養(yǎng)箱/ CO2CELL BMT USA

實驗室經(jīng)理根據(jù)經(jīng)驗和個人品味指定這些設(shè)計。在水套培養(yǎng)箱中工作良好的方法很可能保留在這種類型的設(shè)備中。

水夾套培養(yǎng)箱以溫度穩(wěn)定性而聞名，但是比直接加熱單元更慢地回到溫度設(shè)定點，比如打開門之后。在電源故障的情況下，水套培養(yǎng)箱保持更長時間，但在電源恢復(fù)后需要更長時間才能恢復(fù)到設(shè)定點。由于水套，它們對于給定的工作體積也更大和更重。

水套單元的維護也有些復(fù)雜。用戶必須向夾套水中添加除藻劑，這些培養(yǎng)箱不能采用高熱消毒。無論如何，實驗室傾向于堅持過去的工作，這保證了盡管失去了直接加熱培養(yǎng)箱的一些市場份額，對水套裝置的需求不會很快消失。

許多直接加熱孵育器現(xiàn)在是無風扇的，這提供了幾個好處。BMT USA（蒙羅，華盛頓州）科學(xué)部門業(yè)務(wù)發(fā)展經(jīng)理Rick Ellison解釋說：“通過自然對流移動空氣而不是通過風扇強迫空氣移動，可以減少冷凝和交叉污染。無風扇設(shè)計還通過消除清潔進入空氣的HEPA過濾器的替換來減少維護，因此消除了由風扇本身引起的任何清潔或污染問題。

使用培養(yǎng)箱，機械復(fù)雜性越小越好。“其他設(shè)計可能同樣有效，但他們引入更多的變量，”埃里森說。“變量越少，出現(xiàn)錯誤的可能性越低。

 

設(shè)置，保養(yǎng)，使用

物理位置是確保二氧化碳培養(yǎng)箱高性能的關(guān)鍵。Eppendorf（Enfield，CT）的產(chǎn)品經(jīng)理Lynn Philip建議保持培養(yǎng)箱遠離通風口和陽光直射，這兩個因素都會產(chǎn)生大氣變化，從而影響培養(yǎng)箱并縮短其使用壽命。“通風吃水也攜帶細菌和真菌污染物，”菲利普警告。

CO2培養(yǎng)箱/ CellIQ™/ Panasonic Healthcare /  
無論使用中央氣體系統(tǒng)還是單個氣體罐，用戶都應(yīng)在CO2入口安裝在線壓力調(diào)節(jié)器，以確保氣體以推薦的方式供應(yīng)**小壓力。根據(jù)菲利普，根據(jù)**佳壓力可能導(dǎo)致性能降低和恢復(fù)緩慢，而太高的壓力可能損壞氣體系統(tǒng)。“另外，盡量減少開門的頻率和長度，以保持**佳的細胞培養(yǎng)環(huán)境，”她說。“分開的內(nèi)門可以減少開門過程中文化氣氛的損失。

現(xiàn)在幾乎所有的培養(yǎng)箱都配備了自清潔技術(shù)。**常用的是高熱消毒，這是免費的。對于常規(guī)維護，飛利浦建議用70％異丙醇或制造商推薦的消毒劑清潔。

保持衛(wèi)生

說污染和/或交叉污染是什么時候的問題，而不是如果變成陳腔濫調(diào)。所有更多的理由實驗室為這種可能性做準備。

埃利森推薦的系統(tǒng)具有“強大的滅菌，而不僅僅是凈化”。BMT的滅菌技術(shù)的選擇是干熱高溫的應(yīng)用，但其他方法可能是有效的。不管選擇什么方法，它應(yīng)該是盡可能自動化的（因此是防錯的）。高熱比較低溫化學(xué)或過氧化氫滅菌需要更長時間，但實際上不需要用戶干預(yù)。

CO2培養(yǎng)箱/ C和CB系列BINDER /

硼硅酸鹽玻璃培養(yǎng)管Denville Scientific

過氧化氫滅菌可以基于減少的停機時間來證明。該技術(shù)涉及將過氧化物氣體引入室中，然后使其循環(huán)通過內(nèi)部鼓風機。該技術(shù)與熱相比的缺點是表面和內(nèi)部必須與氣體接觸。**終操作涉及用窄帶寬紫外光激活。制造商聲稱不需要高壓滅菌，因為所有組分在整個過程中保留在外殼內(nèi)。但正如埃里森所指出的，過氧化物滅菌留下一些殘留的無菌水，長期不保持原始狀態(tài)，需要人工去除。然而，制造商要求用于過氧化氫滅菌的約2小時的停機時間，對于高熱量的14小時。

Binder公司（Bohemia，NY）的總裁Uwe Ross將目前正在進行的污染討論比作“打死一匹死馬”。但是去污方法的擴散表明問題仍未解決。“就個人而言，我相信在180°C的熱空氣滅菌是**真正有效的方法，但即使這種技術(shù)也無法解決使用過程中滅菌后發(fā)生的情況。

污染來自生物體沉積在表面上并在冷凝的輔助下生長。這導(dǎo)致將工作表面積減小到****小值的設(shè)計方法; 較少的表面等于微生物生長的較少空間。

二氧化碳培養(yǎng)箱將做它的工作，以保護實驗或過程，但只有當操作者遵循**佳實踐。在其細胞培養(yǎng)的優(yōu)秀引物中，Invitrogen提出以下污染預(yù)防劑：

• 用70％乙醇擦拭手，工作區(qū)域和進入工作區(qū)域的任何東西。
• 避免直接從其工廠容器中倒入介質(zhì)和試劑，并在使用后立即重新密封瓶子。
• 遵循良好的移液實踐：如有疑問，請丟棄。
• 保持瓶子，瓶子和盤子覆蓋，直到使用; 休息帽與他們的頂部。
• 只能使用無菌玻璃器皿和設(shè)備。
• 在工作時消除無償呼氣（唱歌，哨聲），并盡可能快地進行實驗。

購買時要考慮的因素

“回顧短期和長期的實驗室和細胞培養(yǎng)需求，以確定購買的關(guān)鍵因素，”菲利普說。所有培養(yǎng)箱都可以控制溫度，CO 2和可能的O2，但單位可能在設(shè)計和性能上有顯著差異。如果污染是一個問題，實驗室經(jīng)理應(yīng)特別注意培養(yǎng)箱的設(shè)計和時間拆卸，清洗，重新組裝和消毒。“了解未來的要求，因為CO2培養(yǎng)箱是一項長期投資，”Philip繼續(xù)說。“必須評估頭五年的總體擁有成本，包括初始價格，安裝，燃氣使用，清潔的時間和人力，常規(guī)備件等，以確定**佳的價值。

CO2培養(yǎng)箱/ Heracell™240i / Thermo Fisher Scientific
制造商和**終用戶強調(diào)溫度均勻性和恢復(fù)到設(shè)定條件。Thermo Fisher Scientific（Asheville，NC）全球細胞培養(yǎng)**Mary Kay Bates鼓勵買家調(diào)查這些性能因素。“請查看溫度映射和恢復(fù)數(shù)據(jù)。

在考慮回收時，說明參數(shù)是溫度，氣氛組成和濕度。“濕度是性能的關(guān)鍵，而不是每個人都喜歡，”貝茨補充說。

濕度防止水從培養(yǎng)基中蒸發(fā)，這導(dǎo)致營養(yǎng)物，礦物質(zhì)和其他培養(yǎng)基成分變得更濃。“這可能會導(dǎo)致性能不佳，甚**死亡，”貝茨說。

在80％濕度下，蒸發(fā)比在95％濕度下高四倍，這說明為什么濕度是**。大多數(shù)實驗室中發(fā)現(xiàn)的低濕度，空調(diào)環(huán)境空氣加劇了這種影響。

精確的氧氣控制已成為現(xiàn)代培養(yǎng)箱工作的另一個必要條件，特別是對于缺氧（低氧）培養(yǎng)物。生物體內(nèi)的氧氣水平比大氣中的21％水平低得多。此外，所有電池具有獨特的氧氣需求。肝，腎和心臟細胞在生物體內(nèi)在獨特氧水平下**佳地發(fā)揮功能，其甚**可在器官內(nèi)改變。例如，肝細胞需要介于4％和12％之間，這取決于它們與含氧毛細血管的接近程度。神經(jīng)，乳腺癌和免疫細胞將遷移遠離氧梯度，但中G倉鼠卵巢細胞用于生物制造不會。隨著研究人員越來越需要幾乎沒有氧氣存活的細胞，對微調(diào)氧水平的需求從未如此之大。

IPSC的衍生神經(jīng)細胞/ AMSBIO / 
“缺氧文化要求在整個氧氣均勻，以保證底部貨架上的細胞接收相同濃度的中部或上部架細胞，”貝茨說。“你想盡可能重復(fù)生理條件。

除了溫度均勻性和關(guān)鍵培養(yǎng)條件的恢復(fù)，Bates建議購買者考慮自動消毒，以節(jié)省與手動清潔和高壓滅菌相關(guān)的時間和成本。例如，大型細胞培養(yǎng)反應(yīng)器使用自動化就地清洗或現(xiàn)場蒸汽技術(shù); 培養(yǎng)箱使用化學(xué)品和/或熱。一些設(shè)計要求使用者去除內(nèi)部部件并且單獨地清潔或高壓滅菌它們，而在其它設(shè)計中，部件被消毒就位。無論消毒方案如何，其本身不應(yīng)引起污染或細胞損傷的風險。