一、厭氧培養(yǎng)的原理
厭氧培養(yǎng)的原理有兩方面:一是除去與培養(yǎng)基接觸的空氣中的氧氣;二是增強培養(yǎng)基的還原能力,達到吸收容量中的氧氣的目的,是微生物處于無氧的環(huán)境中。 二、實驗器材 菌種:魏氏梭菌
培養(yǎng)基:卵黃瓊脂培養(yǎng)基、皰肉培養(yǎng)基
儀器:恒溫水是培養(yǎng)箱、干燥器、真空泵、玻璃平皿、無菌脫脂棉、透明膠 三、實驗內(nèi)容及方法
取皰肉培養(yǎng)基試劑管煮沸10——15分鐘,感觸其溶解的氧氣,取出,并迅速冷卻,切勿搖動,并按下列步驟操作:
1、接種樣品均質(zhì)液1——2ml或10ml,置于恒溫30.C的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)五天。若無異?,F(xiàn)象可再培養(yǎng)十天。若產(chǎn)生混濁并散發(fā)奇臭怪味或發(fā)酵形成消化肉渣(底部出現(xiàn)黑色沉淀)的即為皰肉培養(yǎng)基試管呈陽性,咋可待用。 2、從陽性皰肉培養(yǎng)基試管中挑出菌種(菌株),劃線于卵黃瓊脂平板待用。 3、將上述處理后的平板**于干燥器內(nèi),在干燥器上涂一層凡士林使其密封,用真空泵抽成真空,立刻關(guān)閉干燥器活塞
4、在干燥器底部預先裝2.0克焦性沒食子酸粉末,并斜置一燒杯,其中裝有200ml20%KOH溶液,當抽氣完畢關(guān)閉干燥器的活塞后,輕輕搖動干燥器,使燒杯傾斜使焦性沒食子酸粉末與KOH溶液互相混合,此時容器中的氧便被吸收 5、在干凈的玻璃平皿底面上預先稱取1g焦性沒食子酸,蓋上一塊無菌脫脂棉,加入10%NAOH1ml,使其緩慢均勻地流入脫脂棉的四周及中心,待脫脂棉呈棕色時,迅速將待用劃線卵黃瓊脂培養(yǎng)基扣緊,接口處用寬透明膠帶貼數(shù)圈(不得有氣泡,保證平整)
6、將干燥皿、干燥器放入恒溫37.C的培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時即可。 四、實驗結(jié)果 觀察菌是否生長